基因診斷與性病/艾滋病診斷

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基因診斷與性傳播疾病

艾滋病

一、診斷依據(jù)：

（1）主要是中度以上細(xì)胞免疫缺陷包括：CD4+T 淋巴細(xì)胞耗竭：T淋巴細(xì)胞功能下降，外周血淋巴細(xì)胞顯著減少，CD4<200/μl，CD4/CD8<1.0，（正常人為1.25～2.1），遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)皮試陰性，有絲分裂原刺激反應(yīng)低下。

（2）B淋巴細(xì)胞功能失調(diào)：多克隆性高球蛋白血癥，循環(huán)免疫復(fù)合物形成和自身抗體形成。

（3）NK細(xì)胞活性下降

（4）各種致病性感染的病原體檢查如PCR。組織學(xué)證實(shí)的惡性腫瘤，如KS；

（三）HIV 抗體檢測

1.酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）；2.明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）；3.免疫熒光檢測法（IFA）；4.免疫印跡檢測法（Western Blot，簡稱WB法）；5.放射免疫沉淀法（RIP）。其中前三項(xiàng)常用于篩選試驗(yàn)，后二者用于確證試驗(yàn)。HIV感染后數(shù)周或數(shù)日內(nèi)常不能檢出抗體，95%的受染者在5個(gè)月內(nèi)可測出抗體。但也有感染后3-4年仍不能檢出抗體者，此時(shí)有必要檢測HIV病毒。

（四）PCR技術(shù)檢測HIV病毒

1．標(biāo)本的采集與模板核酸的制備。從懷疑為AIDS和ARC患者以及無癥狀的同性戀者采集血液標(biāo)本，分成兩份，其中一份送往檢測實(shí)驗(yàn)室與Glyciegel混合進(jìn)行常規(guī)檢驗(yàn)或者在-20～-80℃保存。另一份可在凍存之前通過聚蔗糖（Ficoll）離心分離，收集沉積細(xì)胞。此法亦適用于疑為HIV感染的母親及出生6個(gè)月以上的新生兒的血液標(biāo)本。

可采用下述方法自血液標(biāo)本中分離外周血單核細(xì)胞（PMC）：

① 取4ml血液用Hanks液1：1稀釋。

② 向含有1份淋巴細(xì)胞分離液的試管內(nèi)輕輕加入兩分稀釋的血液，勿攪亂分層。

③ 2500r/min離心20min。

④ 吸出介于淋巴細(xì)胞分散液和血漿層間的PMC層，再用Hanks液洗兩遍。

⑤ 加入RPMI-1640生長液（10%胎牛血清，10%白介素-2，2μg/mlpolyberen 及2.5μg/ml的植物血凝集素P）,使細(xì)胞濃度為2×106/ml。

⑥ 置5%CO2的孵箱內(nèi)于37℃培養(yǎng)2～3d，作為HIV分離的靶細(xì)胞。

2．模板核酸的提取。制備PCR模板核酸有多種方法，但其基本原理大致相同，使用的試劑因采取的方法不同而異。這里分別介紹兩種從外周血單核細(xì)胞中提取DNA和RNA的方法。

（1）從外周血單核細(xì)胞中提取DNA

方法A：

①取1ml經(jīng)37℃快速解凍的Glyciegel凍存細(xì)胞置一支小離心管內(nèi)。

②加入2ml含有10%胎牛血清的RPMI-1640溶液洗一次。

③2500r/min離心10min，棄上清。

④沉淀的細(xì)胞用PBS洗兩次，最后將細(xì)胞懸浮在溶液A（100mmol/KCl，10mmol/LTris-HCl，pH8.3）中，使細(xì)胞濃度為6×106/ml。

⑤加入等體積的溶液B（10mmol/LTris-HCl，pH8.3，2.5mmol/l MgCl2，10%Tween20，10%NP-40）。

⑥　于37℃保濕后置冰箱保存。

該方法也適用于無Glyciegel保存的肝素標(biāo)本及新鮮樣品經(jīng)聚蔗糖-400離心制備的淋巴細(xì)胞DNA的提取。

方法B：

①取4ml經(jīng)37℃快速解凍的Glyciegel標(biāo)本。

②2500r/min離心10min，收集沉淀的細(xì)胞，上清液可作血清學(xué)研究用。

③用10ml0.9%NaCl（含50%葡萄糖）將沉淀的細(xì)胞洗一次。

④再用10ml 0.9%NaCl（含50%葡萄糖）洗兩次。

⑤通過聚蔗糖-400離心，分離單核細(xì)胞。

⑥將單核細(xì)胞懸浮于0.5ml裂解緩沖液（10mmol/L，Tris-HCl pH8.3，10mmol/L EDTA，10mmol/L NaCl，0.5%SDS，100μg/ml蛋白酶K）中使細(xì)胞裂解。

⑦用酚一氯仿抽提兩次，將水相轉(zhuǎn)移到一支新的離心管內(nèi)。

⑧加入3倍體積的無水乙醇，于-20℃放置20min，13000r/min離心10min，棄上清，沉淀物經(jīng)真空干燥后，用100μl蒸H2O溶解，于-20℃保存。

該方法也適用于標(biāo)本經(jīng)聚蔗糖-400離心制備的單核細(xì)胞DNA的提取。

（2）從外周血單核細(xì)胞中提取RNA及其反轉(zhuǎn)錄

方法A：

① 5ml血液標(biāo)本，通過聚蔗糖-400離心制備外周血單核細(xì)胞。

② 將細(xì)胞懸浮于10mlRPMI-1640離心制備外周血單核細(xì)胞。

③ 2500r/min離心20min，收集沉積細(xì)胞。

④把細(xì)胞懸浮于一定體積的預(yù)冷的裂解緩沖液（0.4mmol/L NaCl，10mmol/l Tris-HCl，pH8.3，1.5mmol/L MgCl2,0.5% NP-40）中,使細(xì)胞濃度為104/ml。

⑤ 13000r/min，于4℃離心10min，收集上清液。

⑥ 把含有RNA的上清液轉(zhuǎn)移到一支新管內(nèi)，立即置-80℃保存，備用。

在RNA反轉(zhuǎn)錄前，先將RNA樣品用DNase處理，除去樣品中殘留的DNA。經(jīng)反轉(zhuǎn)錄得到的cDNA即可進(jìn)行PCR擴(kuò)增。RNA反轉(zhuǎn)錄操作如（7）～（9）。

⑦ 取10μlRNA樣品加2.7UDNase I。

⑧ 于37℃保溫10min,93℃10min,立即放入冰浴中冷卻。

⑨ 另將一份DNase I處理過的RNA樣品，加入RNase A（15μg/份），37℃保溫10min，置-20℃保存。

方法B：

①取5ml新鮮血漿置一支離心管內(nèi)。

②40000r/min，4℃離心10min，收集沉淀。

③將沉淀物溶于變性液（4.0mmol/L異硫氰酸胍,25mmol/L檸檬酸緩沖液pH7.0,0.5sarcosyl,0.1mmol/L2-巰基乙醇）中充分混勻.

④加入30μl2mmol/L乙酸鈉緩沖液pH4.2,400μl酚和80μl氯仿/異戊醇混合液(24:1),萃取1min,冰上放置20min.

⑤13000r/min離心20min.

⑥輕輕將水相轉(zhuǎn)移到一支新管中.

⑦加入3倍體積的無水乙醇,-20℃放置1h左右.

⑧13000r/min,4℃離心15min,收集沉淀.

⑨沉淀物用75%乙醇洗滌兩次,真空干燥.

⑩加入10μl 水溶解,立即置-80℃保存或者反轉(zhuǎn)錄.

⑾ 取10μl RNA樣品.

⑿ 加入10μl 1×PCR緩沖液(50mmol/LNaCl，10mmol/L Tris - HCl，pH8.3,1.5mmol/L MgCl2 0.01%明膠),各0.2mmol/L四種dNTP,10pmol/GN GHd QLP GX PUH R XHHTR 39,20URNA酶抑制劑(RNsin),10U的AMV逆轉(zhuǎn)錄酶。

⒀ 42℃保溫30～60min,然后93℃5min.

⒁ 立即置冰浴中冷卻，備用。

由上述方法制得的RNA反轉(zhuǎn)錄樣品，通過10%聚丙烯酰胺凝膠電泳可鑒定其特異性。

二、PCR擴(kuò)增步驟

（一）引物的設(shè)計(jì)與合成

HIV PCR引物設(shè)計(jì)應(yīng)遵尋引物設(shè)計(jì)的一般原則。由于HIV基因易發(fā)生變異，因而引物應(yīng)在保守區(qū)內(nèi)設(shè)計(jì)，一般在pol、evn、gag、tat基因中的核酸序列內(nèi)設(shè)計(jì)，HIV感染的細(xì)胞往往很少，要從106個(gè)正常細(xì)胞中檢出1個(gè)HIV感染細(xì)胞，PCR擴(kuò)增的引物首先要具有特異的結(jié)合HIV相應(yīng)基因能力，同時(shí)一般要采用巢式-PCR方法，來提高檢測的靈敏性。

檢測HIV引物的第二步驟就是擴(kuò)增HIV感染細(xì)胞中的原病毒DNA。感染細(xì)胞與未感細(xì)胞混合得到連續(xù)的10倍感染細(xì)胞的稀釋液。通常由103/106個(gè)感染細(xì)胞稀釋至1/106個(gè)感染細(xì)胞。同時(shí)用其它逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細(xì)胞的DNA作對照，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。然后通過Southern雜交及DNA序列分析，進(jìn)一步確定擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。

已經(jīng)被確定的保守區(qū)是gag，tat，evn，pol基因中的某些核苷酸序列。在用于臨床標(biāo)本檢測之前，要對引物的特異性進(jìn)行鑒定。通常取100pg含有HIV基因組序列的質(zhì)粒DNA稀釋液和2μg載體鯡魚精DNA。如引物是特異的，它們就會(huì)指導(dǎo)單一的雙股DNA片段的合成。合成的DNA片段相對應(yīng)于兩引物5′末端之間距離。如果是另一種DNA模板，就不會(huì)合成任何DNA片段。如果合成的DNA片段不是所預(yù)期的或除了有所預(yù)期的片段還有其它的DNA片段，那么可以考慮對PCR的條件進(jìn)行某些改進(jìn)，看是否能改善其特異性，否則要另選引物。

表6-20 用于HIV PCR擴(kuò)增的引物及探針

引物及探針	序列（5′3′）	基因區(qū)	片段（bp）
SK38	ATAACCACCTATCCCAGTAGGATAAAT	gag	115(HIV1)
SK39	TTTGGTCCTTGTCTTATGTCCAGAATGC
SK19(P)	ATCCTGGGATTAAATAAAATAGTAAGAATGTATAGCCCTAC
SK145	AGTGGGGGGACATCAAGCAGCCCATGCAAAT	gag	141(HIV1)
SK101	GCTATGTCAGTTCCCCTTGGTTCTC		139(HIV2)
SK102(P)	GAGACCATCAATGAGGAAGCTGCAGAATGGGAT
SK145	AGTGGGGGGACATCAAGCAGCCCATGCAAAT	gag	142(HIV1)
SK150	TGCTATGTCACTTCCCCTTGGTTCTCTC		139(HIV2)
SK102(P)	GAGACCATCAATGAGGAAGCTGCAGAATGGGAT
O-1	GGGCAAATGGTACATCAGGCCATATCAC	gag	525(HIV1)
O-2	TTTTACCTCCTGTGAAGCTTGCTCGGTC
I-2	TTGGTCCTTGTCTTATGTCC	gag	422(HIV1)
I-1	TTAATACGACTCACTATAGGGTAGAAGAGAAGGCTTTCAGC
GK55	CCTGCTATGTCACTTCCCCT	gag	190(HIV1)
GK56	TTATCAGAAGGAGCCACCCC
P-1	TTCTGTCAATGGCCATTGTTTAACTTTTGGGCCAT	pol	355(HIV1)
P-2	TAAAGGAAGCAAGCTCTATTAGATACAGGAGCAGCTGA
SK29	ACTAGGGAACCCACTGCT	Itr	105(HIV1)
SK30	GGTCTGAGGGATCTCTA
SK31(P)	ACCAGAGTCACACAACAGACGGGCACACACTACT
P13	TGGCGCCCGAACAGGGAC	LTR	168
P14	TACCCACGCTCTCGCAG
SK89	AGGAGCTGGTGGGGAACG	LTR	165(HIV2)
SK90	GTGCTGGTGAGAGTCTAGCA
SK91(P)	TTGAGCCCTGGGAGGTTCTCTCCAGCACTAGCAGGTAG
SK68	AGCAGCAGGAAGCACTATGG	env	142(HIV1)
SK69	CCAGACTGTGAGTTGCAACAG
SK70(P)	ACGGTACAGGCCAGACAATTATTGTCTGGTATAGT
CO1	ACAATTATTGTCTGGTATAG	env	135(HIV1)
CO2	AGGTATCTTTCCACAGGCAG
CO3(P)	TGAGTTGCAACAGATGCTGTTGCGCCTCAATAGCCCTCAG
CO71	TGTGGAGGGAATTCTTCTACTGTAA	env	320(HIV1)
CO72	TATAGAATTCACTTCTCCAATTGTCCCTCAT
CO75(P)	GAAATATTACAGGGCTGCTATTAACAAGAGATGGTGGTAA

（二）PCR擴(kuò)增步驟

1．?dāng)U增條件

當(dāng)選擇的引物影響其特異性和擴(kuò)增效果時(shí)，首先應(yīng)考慮擴(kuò)增的條件是否適宜。這些條件包括退火溫度，PCR循環(huán)數(shù)，反應(yīng)物濃度等。擴(kuò)增的條件通常是1～4mmol/LMgCl2，0.5～1.0mmol/ldNTP,每100μl反應(yīng)體積2～4U Taq DNA聚合酶,2μgBSA,10pg靶DNA,擴(kuò)增25～30循環(huán),退火溫度為37℃,引物濃度6μg/ml。在37～55℃之間變更退火溫度可以找到提高產(chǎn)量和特異性的最佳溫度.盡管每個(gè)實(shí)驗(yàn)室使用的擴(kuò)增條件略有差異,但它們的原理都是相似的。

2.擴(kuò)增的步驟

(1)取10μl (1.2μg)HIV-DNA樣品。

(2)用10μl 1×PCR緩沖液(100mmol/LTris-HClpH8.8,500mmol/l KCl，2mmol/L MgCl₂,16mmol/LDTT)。

(3)加入10μl ,各1mmol/LdNTP,6.6μg/ml引物。

(4)反應(yīng)混合物于93℃變性處理7min。

(5)冷卻至室溫,加入4UTaqDNA聚合酶,反應(yīng)最終體積為100μl。

(6)加入50μl礦物油,離心10s。

(7)置70℃保溫5min。

(8)PCR擴(kuò)增25個(gè)循環(huán),95℃1min,55℃1min,70℃ 1min,最后于70℃延伸10min。

PCR檢測出現(xiàn)假陰性的原因有：標(biāo)本中的HIV-DNA量極少，未能有效地?cái)U(kuò)增或擴(kuò)增產(chǎn)物達(dá)不到檢測水平；DNA模板和PCR產(chǎn)物未能完全變性，使得引物不能或較少與DNA片段結(jié)合，從而降低了最終產(chǎn)物的產(chǎn)量。如果臨床標(biāo)本中的HIV基因發(fā)生變異，也會(huì)出現(xiàn)假陰性。PCR假陽性的原因主要有：標(biāo)本的交叉污染；重復(fù)使用不干凈的器具。此外還要合理設(shè)置對照，陰性對照用無HIV-DNA標(biāo)本的反應(yīng)混合液，陽性對照用已知的HIV-DNA。

三、擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測和分析

擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測和分析可采用凝膠電泳，限制性內(nèi)切酶圖譜，DNA序列分析及分子雜交等技術(shù)。

（一）凝膠電泳分析

根據(jù)所采用的引物對之間DNA片段的長度，預(yù)計(jì)PCR產(chǎn)物的分子大小。通過與凝膠電泳后的DNA片段相比較，可初步判斷PCR產(chǎn)物的特異性，然后將產(chǎn)物用限制性內(nèi)切酶水解，進(jìn)一步確定擴(kuò)增產(chǎn)物的特異性。

（二）分子雜交分析

分子雜交既是檢測PCR產(chǎn)物特異性的一種較好的方法，也是檢測擴(kuò)增產(chǎn)物的非限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)上堿基突變的有效方法。分子雜交法是根據(jù)標(biāo)記探針與兩條引物鏈之間特異DNA片段的互補(bǔ)性進(jìn)行的。結(jié)果陽性說明PCR產(chǎn)物是特異性的。可利用多種等位基因特異性寡核苷酸探針與PCR產(chǎn)物進(jìn)行分子雜交，檢測PCR產(chǎn)物的堿基突變?，F(xiàn)將檢測HIV-DNA的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物常用的幾種分子雜交技術(shù)分別介紹如下：

PCR擴(kuò)增技術(shù)和分子雜交的敏感性。

PCR技術(shù)檢測HIV具有敏感性高，特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。該方法可檢測血液及組織標(biāo)本中微量的HIV及前病毒序列。如對HIV-1感染H9細(xì)胞的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行液相雜交和EB染色的電泳凝膠來檢測PCR技術(shù)的靈敏性?？蓹z測到0.05感染細(xì)胞的RNA量(相當(dāng)于5個(gè)感染H9細(xì)胞的HIV-1-RNA/5×106個(gè)未感染細(xì)胞)。

四、PCR技術(shù)在HIV檢測中的應(yīng)用

PCR可用來追蹤HIV的自然感染史?？稍谄渌鍖W(xué)和病毒學(xué)標(biāo)志出現(xiàn)前檢測病毒序列，這樣可判定無癥狀而且血清陰性患者潛在的HIV的傳播性；可用來監(jiān)測長潛伏期（4～7年）病人，以及在抗病毒治療期間病毒的水平；也可用于HIV-1血清陽性母親的嬰兒的HIV檢測。在嬰兒出生后最初的6～9個(gè)月期間，他們的血液中存在母體的抗體，因此用PCR可判定嬰兒是否真正被HIV感染。

（一）血清抗體陽性病人HIV序列的檢測

有人從AIDS或ARC病人的外周血單核細(xì)胞培養(yǎng)物，精液細(xì)胞和精液上清制備DNA。然后用PCR法和逆轉(zhuǎn)錄酶測定法分別檢測HIV-1。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物與32P標(biāo)記的探針退火之后用BstNI消化。再進(jìn)行聚丙烯酰胺凝膠電泳和自顯影。結(jié)果表明，在逆轉(zhuǎn)錄酶陰性的28個(gè)細(xì)胞系中有9個(gè)以及用逆轉(zhuǎn)錄酶法不能確定的9個(gè)細(xì)胞系中有2個(gè)為陽性。這說明過去許多細(xì)胞培養(yǎng)物認(rèn)為是陰性者，實(shí)際上用更敏感的PCR測定時(shí)則為陽性。

從血清陽性的HIV感染者的外周血單核細(xì)胞中可檢測出前病毒序列。通過共培養(yǎng)分離出病毒的血清陽性的同性戀男人血液制備的DNA，用PCR可100%檢出病毒序列；用血清陰性共培養(yǎng)陰性同性戀者的標(biāo)本，經(jīng)PCR擴(kuò)增檢出病毒序列者為64%，血清陰性正常人標(biāo)本PCR檢測也為陰性，表明未出現(xiàn)假陽性結(jié)果。由于HIV-1基因組的廣泛的異源性，為提高檢測的陽性率可采用多種引物（如LTR，gag和env基因的引物）。利用PCR法從313份已證實(shí)為抗體陽性的標(biāo)本中檢測出310份HIV陽性（99%）。

(二)血清抗體陰性病人的HIV序列的檢測

由于在感染HIV后到出現(xiàn)免疫反應(yīng)之前有一段滯后期,這個(gè)血清學(xué)陰性的滯后期通常長達(dá)6周至6個(gè)月,而且無抗體產(chǎn)生期可能更長些.在此期間受感染者往往檢測不到抗體,因此,血清陰性的人也可能已感染HIV.PCR法在高危人群中檢測到HIV-1比由血清學(xué)轉(zhuǎn)陽確診的時(shí)間可以提高6個(gè)月對少數(shù)初次共培養(yǎng)呈陰性的人,甚至可在血清轉(zhuǎn)陽之前24～39個(gè)月就能確診為HIV-1感染.對血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果不能確定者,也可通過PCR作進(jìn)一步分析和確診。

(三)新生兒HIV序列的檢測

HIV感染的母親其嬰兒由于母體抗體的存在,用抗體檢測法通常為陽性.但實(shí)際上只有20%～60%的嬰兒受到HIV感染.因此,對這些嬰兒進(jìn)行HIV感染的早期診斷是十分重要的.現(xiàn)已證明30～50%的這些新生兒可在母親的子宮里,在分娩和引產(chǎn)或通過產(chǎn)后哺乳時(shí)從其母體感染HIV.新生兒血清陽性者并不能說明是HIV感染.因?yàn)槟阁wHIV抗體可持續(xù)大約15個(gè)月久.在一般情況下,嬰兒并不表現(xiàn)出HIV感染的任何癥狀.病毒細(xì)胞培養(yǎng)法對嬰兒并不是一種可靠實(shí)用的方法;HIV特異IgM抗體的檢測在母體抗體存在下也是不可能的;在過量血清抗體存在下檢出血清中的HIV抗原也是十分困難的.另外,嬰幼兒被HIV感染后病情發(fā)展較快.早期診斷,對及時(shí)采取治療措施,延緩阻止病情發(fā)展極為重要.目前所使用的抗病毒藥毒性大,因而不能用于HIV抗體陽性而未感染的嬰幼兒.但當(dāng)用PCR檢測出HIV-DNA序列后,即可進(jìn)行抗病毒治療以及加強(qiáng)免疫機(jī)能和營養(yǎng)的治療.在一項(xiàng)研究中,14名血清陽性母親的新生兒用PCR檢測其中6個(gè)為陽性;在出生后12～15個(gè)月內(nèi)血清陰性的10個(gè)兒童中有5個(gè)為PCR陽性.從血清陽性母親出生1個(gè)月的新生兒中,收集的外周血單核細(xì)胞經(jīng)PCR檢測,7個(gè)為陽性的嬰兒,其中5個(gè)在檢測后10個(gè)月得AIDS;而PCR陰性的9個(gè)嬰兒,在16個(gè)月的追蹤檢查期間身體狀況良好.這些研究表明,PCR技術(shù)對被HIV感染母親的新生兒和血清陰性兒童進(jìn)行早期的直接的HIV-1檢測是十分重要的.

PCR技術(shù)檢測HIV-DNA序列對AIDS和ARC的確診起著重要作用.但也有人認(rèn)為對已知HIV抗體、抗原或培養(yǎng)陽性的病人不必再做PCR。最合適的PCR檢測對象是那些疑有HIV感染但又缺乏確切的血清學(xué)依據(jù)的人群，如上述的HIV陽性母親所生的嬰兒，陽性患者的性伴侶，靜脈吸毒者和可疑的血清反應(yīng)者。PCR技術(shù)還可用來檢測血液制品及疫苗中有無HIV。

五、艾滋病診斷標(biāo)準(zhǔn)：

1．艾滋病病毒抗體陽性，又具有下述任何一項(xiàng)者，可為實(shí)驗(yàn)確診艾滋病病人。

（1）近期內(nèi)（3-6個(gè)月）體重減輕10%以上，且持續(xù)發(fā)熱達(dá)38℃一個(gè)月以上；

（2）近期內(nèi)（3-6個(gè)月）體重減輕10%以上，且持續(xù)腹瀉（每日達(dá)3-5次）一個(gè)月以上。

（3）卡氏肺囊蟲肺炎（PCR）

（4）卡波濟(jì)肉瘤KS。

（5）明顯的霉菌或其他條件致病感染。

2．若抗體陽性者體重減輕、發(fā)熱、腹瀉癥狀接近上述第1項(xiàng)時(shí)，可為實(shí)驗(yàn)確診艾滋病病人。

（1）CD4/CD8（輔助/抑制）淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)比值<1，CD4細(xì)胞計(jì)數(shù)下降；

（2）全身淋巴結(jié)腫大；

（3）明顯的中樞神經(jīng)系統(tǒng)占位性病變的癥狀和體征，出現(xiàn)癡呆，辯別能力喪失，或運(yùn)動(dòng)神經(jīng)功能障礙。